Takara pcr odpravljanje težav

Namesto tega bo treba optimizirati pogoje PCR; Pri prilagajanju pogojev PCR upoštevajte naslednje:

1. Zmanjšajte količino predloge.
2. Povečajte temperaturo žarjenja.
3. Uporabite dotik PCR.
4. Zmanjšajte število ciklov PCR.
5. Preoblikovanje temeljnih premazov.
6. Uporabite ugnezdene začetnike.
7. Ponovno povečajte izdelek.

1. Zakaj moj PCR ne deluje?
2. Kako optimizirate pogoje PCR?
3. Kaj povzroča razmaz pri PCR?
4. Kako veste, ali je PCR kontaminiran?

Zakaj moj PCR ne deluje?

Pozabljanje samo na eno komponento reakcije PCR, pa naj gre za DNA polimerazo, primerje ali celo šablonsko DNA, bo povzročilo neuspešno reakcijo. Najpreprostejša rešitev je ponovitev reakcije. ... Če po tem še vedno ni izdelka PCR, obstaja velika verjetnost, da vaš odziv ovira kaj drugega.

Kako optimizirate pogoje PCR?

Pogoji PCR

1. Uporabite višje temperature denaturacije (npr.g., 98 ° C v nasprotju s 94 ° C ali 95 ° C), da se omogoči popolna denaturacija predloge.
2. Naj bodo časi žarjenja za predloge, bogate z GC, čim krajši.
3. Uporabite temeljne premaze z višjim T_m (>68 ° C), ker lahko pri višji temperaturi pride do žarjenja.

Kaj povzroča razmaz pri PCR?

Kontaminacija DNA, RNA v vzorcu DNK, visoka koncentracija DNA v reakciji PCR lahko povzročijo razmazovanje. ... Razmazovanje DNK običajno povzroči v rastlinah zaradi visoke koncentracije šablonske DNK.

Kako veste, ali je PCR kontaminiran?

Če želite preveriti kontaminacijo raztopine, sestavite reakcije negativne kontrole z novimi reagenti, za katere je znano, da niso kontaminirani, in vsaki reakciji dodajte eno od sumljivih raztopin. Ta reakcija kaže, da so ojačani produkti, ki kažejo na kontaminacijo, dokaz, da je bila dodana raztopina kontaminirana.