Topmusicanswers
- Zakaj pri PCR ni ojačanja?
- Zakaj se moja DNK ni okrepila?
- Kaj se zgodi, če pramenov ne dodamo PCR?
- Kako popraviti nespecifično amplifikacijo v PCR?
Zakaj pri PCR ni ojačanja?
Če je začetna količina predloge prenizka, lahko pride do nezadostnega povečanja. Povečajte število ojačevalnih ciklov v korakih po 5 ali, če je mogoče, povečajte količino predloge. Onesnaževalci v mešanici dNTP lahko povzročijo nepopolno ali nepravilno ojačanje ali zaviranje PCR. Uporabite visokokakovostne dNTP-je.
Zakaj se moja DNK ni okrepila?
1) morda imate slabo zasnovo temeljnega premaza ali standardizacijo reakcij (zato ocenite zasnovo temeljnega premaza in naredite, kot so že drugi povedali, gradientno PCR za oceno različnih temperatur žarjenja); 2) Brez DNK (vaš protokol ekstrakcije je morda spodletel), zato se lahko vaši temeljni premazi medsebojno žarijo (ali pa jih pomešajo).
Kaj se zgodi, če pramenov ne dodamo PCR?
Vprašanje: Če ste pozabili dodati temeljne premaze v reakcijo PCR, kaj bi se zgodilo in zakaj? 1. Vaša reakcija ne bi uspela, ker Taq polimeraza ne more dodati baz brez že prisotnega majhnega kosa DNK. ... Vaša reakcija ne bi uspela, ker ne bi bilo encima, ki bi lahko dodal nove nukleotidne baze.
Kako popraviti nespecifično amplifikacijo v PCR?
Če je koncentracija predloge visoka, uporabite manj ciklov, pri nizki koncentraciji predloge pa uporabite več ciklov. 2. Čas podaljšanja je bil predolg: predolg čas podaljšanja lahko omogoči nespecifično povečanje. Na splošno uporabite podaljšanje za 1 min/kb.
